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英文名:T7 RNA Polymerase
本酶來源于由大腸桿菌表達,表達基因為嗜菌體T7 RNA Polymerase基因,是一種高度特異識別T7啟動子序列的DNA依賴的5"→3"RNA聚合酶。T7 RNA Polymerase可以催化單鏈或雙鏈DNA T7啟動子下游NTP的摻入,合成與T7啟動子下游的模板DNA互補的RNA。
特點:T7 RNA Polymerase可以識別修飾的NTP,例如生物素標記、地高*(代"辛")標記、熒光素標記的NTP,可以用于各種標記RNA的合成。同時對于T7啟動子有高度的特異性。
活性定義: 37℃60分鐘內,催化1 nmol AMP摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件:40mM Tris-HCl(pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP,0.6MBq/ml[3H]-ATP,20μg/ml plasmid DNA containing the specific T7 RNA Polymerase promoter sequence。
純度:不含DNA內切酶和外切酶,不含RNA酶。
酶儲存溶液:50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,5mM DTT,0.1mg/ml BSA,0.5mM Elugent,50% glycerol。
Transcription Buffer(5X):200mM Tris-HCl(pH7.9 at 25℃),30mM MgCl2,50mM DTT,50mM NaCl,10mM spermidine。
失活或抑制:70℃加熱10分鐘可使T7 RNA Polymerase失活。加入適量EDTA也可以使T7 RNA Polymerase失活。螯合劑、濃度大于150mM的鈉、鉀或銨鹽可以顯著抑制T7 RNA Polymerase的活性。
用途:用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:雜交探針,基因組DNA序列分析,核糖核酸酶保護測定(RNase protection assay),反義RNA合成,作為體外翻譯的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二級結構和RNA-蛋白質相互作用,核酸擴增分析,siRNA、miRNA等小RNA。
保存:-20℃